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成分分析,配方還原,食品檢測,藥品檢測,化妝品檢測,環境檢測,性能檢測,耐熱性檢測,安全性能檢測,水質檢測,氣體檢測,工業問題診斷,未知成分分析,塑料檢測,橡膠檢測,金屬元素檢測,礦石檢測,有毒有害檢測,土壤檢測,msds報告編寫等。

表達蛋白檢測

發布時間:2025-07-10

關鍵詞:表達蛋白測試周期,表達蛋白測試方法,表達蛋白測試案例

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來源:北京中科光析科學技術研究所

文章簡介:

表達蛋白檢測聚焦重組蛋白、抗體等產品的理化特性及功能分析。核心檢測包括純度定量、結構表征、生物活性驗證及污染物篩查,需嚴格遵循生物分析規范。關鍵質控點覆蓋分子量測定、等電點分析、二硫鍵定位及宿主蛋白殘留檢測。
點擊咨詢

因業務調整,部分個人測試暫不接受委托,望見諒。

檢測項目

純度分析:通過SDS-PAGE電泳與高效液相色譜(HPLC)測定目標蛋白占比,非還原電泳分辨率達5 kDa,RP-HPLC檢測限0.1μg/mL

濃度定量:BCA法檢測范圍0.5-2000μg/mL,紫外分光光度法精度±2%(A280/A260校正)

分子量測定:MALDI-TOF質譜精度±0.05%,ESI-MS可解析500-500kDa復合物

等電點檢測:毛細管等電聚焦(cIEF)分辨率0.05 pI單位,pH梯度范圍3-10

二硫鍵定位:胰蛋白酶酶解后LC-MS/MS分析,Cys殘基覆蓋度>98%

糖基化分析:HILIC-UPLC解析N-糖譜,靈敏度10fmol;PNGaseF釋放糖鏈后MALDI-TOF檢測

宿主蛋白殘留:ELISA檢測限0.1ng/mg,Western Blot特異性結合能力1ppm

內毒素檢測:鱟試劑法(LAL)動態范圍0.001-50EU/mL,符合USP<85>規范

生物活性測定:基于細胞增殖的ED50檢測變異系數≤15%,受體結合SPR分析KD值精度10pM

聚集體分析:SEC-MALS聯合檢測,可分辨0.1%寡聚體,分子量范圍10kDa-10MDa

肽圖鑒定:Trypsin/Lys-C雙酶解,UPLC-QTOF序列覆蓋度≥95%,錯切率<2%

殘留DNA檢測:qPCR定量靈敏度≤10pg/mg,探針法特異性識別CHO/HEK293宿主基因組

檢測范圍

重組治療蛋白:含單克隆抗體、融合蛋白、細胞因子等,需完成CQA關鍵質量屬性評估

疫苗抗原:病毒樣顆粒(VLP)構象驗證,佐劑結合效率檢測

體外診斷試劑:標記抗體效價測定,校準品溯源分析

細胞培養上清:表達產物滴度監控,培養基成分干擾排除

蛋白純化中間體:親和層析洗脫液純度監測,離子交換組分收集驗證

凍干制劑:復溶穩定性測試,賦形劑相容性分析

工業酶制劑:比活性測定(IU/mg),熱穩定性加速實驗

蛋白偶聯物:抗體-藥物偶聯物(ADC)藥物抗體比(DAR)測定,連接位點確認

細胞治療產物:CAR蛋白膜表達流式檢測,轉染效率驗證

飼料添加劑:重組酶耐胃酸實驗,腸溶包衣完整性測試

生物材料涂層:膠原蛋白交聯度測定,表面吸附定量分析

食品強化劑:乳鐵蛋白熱變性溫度(Tm)測定,過敏原交叉反應篩查

檢測標準

ISO 13022:2012 醫療產品中重組蛋白活性測定規范

EP 2.6.1 歐洲藥典蛋白氮含量凱氏定氮法

USP<129> 高效液相色譜法測定蛋白純度

GB/T 34800-2017 蛋白質二硫鍵分析質譜法

ASTM E3029-15 圓二色譜法測定蛋白二級結構

ICH Q6B 生物技術產品特性鑒定標準

CP 2020 3431 中國藥典宿主細胞蛋白殘留ELISA法

ISO 10993-18 醫療器械材料蛋白吸附評價

GB 5009.8-2016 食品中蛋白質的測定

ISO 21572:2019 食品中轉基因生物表達蛋白檢測

PDA TR49 生物制品中可見異物檢查指南

ASTM WK63561 納米載體蛋白結合效率測試草案

檢測儀器

Agilent 1260 Infinity II HPLC系統:配置DAD/FLD檢測器,執行SEC純度分析,流速精度±0.1%,溫控范圍4-80℃

Waters ACQUITY UPLC H-Class Bio:采用BEH300 C4色譜柱(1.7μm),完成肽圖分離,耐壓15000psi

Bruker timsTOF Pro質譜儀:結合PASEF技術實現高通量蛋白鑒定,掃描速度200Hz,分辨率>60,000

Malvern Panalytical Viscotek SEC-MALS 20:多角度光散射檢測器(λ=658nm),聯機RI與UV檢測,實時計算絕對分子量

Cytation 5細胞成像多功能檢測系統:整合熒光顯微鏡與微孔板閱讀器,執行基于報告基因的活性檢測,Z軸分辨率0.1μm

BIACORE T200表面等離子共振儀:檢測分子互作動力學,流速范圍0.1-200μL/min,溫控精度0.005℃

Beckman PA 800 Plus藥物分析系統:毛細管電泳平臺,cIEF分辨率0.02pI,UV檢測波長190-600nm

PerkinElmer Lambda 950分光光度計:Far-UV CD光譜范圍175-260nm,溫控池支持變性溫度掃描

Applied Biosystems QuantStudio 7 qPCR儀:執行殘留DNA檢測,支持TaqMan探針法,動態范圍10個數量級

Wyatt DynaPro NanoStar動態光散射儀:檢測蛋白流體力學半徑,樣品體積1μL,溫度范圍-10-120℃

GE ImageQuant 800凝膠成像系統:ChemiDoc模式檢測Western Blot,CCD分辨率400萬像素,線性范圍4.8 OD

Roche Cedex Bio HT細胞分析儀:自動化監測表達蛋白發酵過程,通量96孔/5分鐘,pH/DO測量誤差±0.5%

檢測流程

1、咨詢:提品資料(說明書、規格書等)

2、確認檢測用途及項目要求

3、填寫檢測申請表(含公司信息及產品必要信息)

4、按要求寄送樣品(部分可上門取樣/檢測)

5、收到樣品,安排費用后進行樣品檢測

6、檢測出相關數據,編寫報告草件,確認信息是否無誤

7、確認完畢后出具報告正式件

8、寄送報告原件

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